LSY-10062 El kit de pruebas de ELISA de ciprofloxacina 1ppb detección de residuos de antibióticos

La ciprofloxacinaEl kit ELISA

No de catálogo LSY-10062

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de ciprofloxacina en muestras.La ciprofloxacina presente en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por los anticuerpos contra la ciprofloxacina.Después de la adición del conjugado enzimático, se añade el sustrato TMB para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la ciprofloxacina en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de ciprofloxacina..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad:1Pb y p

Temperatura de incubación: 25°C

Tiempo de incubación: 30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección: alrededor de 1ppb

Tasa de reacciones cruzadas:

La ciprofloxacina (CIF) 100%

Tasa de recuperación

Tejido, óvulos, suero 80±15%

Miel 75±15%

3. Componentes

• Las bandas de micro-pozo: 12 bandas con 8 pozos extraíbles cada una
• 6 veces la solución estándar (1 ml cada una): 0ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb y 81ppb
• Conjugado de enzimas (7 ml) con tapa roja
• Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml) tapa azul
• Substrato solución A (7 ml) con tapa blanca
• Solución de sustrato B (7 ml) con tapa negra
• Solución de parada (7 ml) tapa amarilla
• 20× tampón blanco de tampón de lavado concentrado (40 ml)
• 2× solución de redisolución concentrada (50 ml) con tapa transparente

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipamiento:Lector de microplacas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, centrífuga, pipetas de medición, balanza (sensibilidad recíproca de 0,01 g)
• Los micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μL, de 100 a 1000 μL y de varios canales de 250 μL;
• Los reactivos:HCl, cloruro de metileno, acetonitrilo (CH)₃No obstante lo dispuesto en el apartado 1, las sustancias enumeradas en el punto 1 se considerarán sustancias peligrosas para la salud.₂HPO₄·12H₂O, NaH₂Oficina de trabajo₄·2H₂O, heparina sódica

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben tratarse antes del pretratamiento)

1) Este kit de prueba puede detectar muestras de tejido: tejido animal, aves de corral, acuático, por ejemplo: pollo, pato, bovino, conejo, pescado, camarón, etc.

• Sólo se podrán utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
• Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados del experimento.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

• 0.1 M HCl: 860 μl de HCI (36%) + agua desionizada 100 ml.
• Acetonitril (CH)₃CN) - Solución de mezcla de cloruro de metileno

V._Acetonitril- ¿Qué quieres?_{Cloruro de metileno}=1, 4. ¿ Qué?

• pH7.2 0,02M PB tampón: disolver 5,16 g de Na₂HPO₄·12H₂O + 0,87 g de NaH₂Oficina de trabajo₄·2H₂O en el agua desionizada hasta 1 L.
• Acetonitril (CH)₃CN) - Cloruro de metileno- solución de mezcla de 0,1 M HCl

100 ml de acetonitrilo (CH)₃CN) -Solución de mezcla de cloruro de metileno (V._Acetonitril- ¿Qué quieres?_{Cloruro de metileno}= 4: 1), añadir 5 ml de solución de HCl de 0,1 M.

• La solución de redisolución concentrada 2× se diluye con agua desionizada a 1:1 (1 ml de solución de redisolución concentrada + 1 ml de agua desionizada), utilizada para la redisolución de la muestra.

5.1Tejidos (pollo/hígado, cerdo/hígado, pescado, camarón, etc.)¡Huevo!

1) Se pesan 2,0 ± 0,05 g de la muestra de tejido homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml.

2) Añadir 8 ml de acetonitrilo (CH)₃CN) - Solución de mezcla de cloruro de metileno, agitada durante 5 min, centrifugada a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 10 min

3) Tomar 4 ml de la fase orgánica clara (capa superior) en un tubo seco, soplar para secar con nitrógeno o aire completamente por evaporación rotativa a 56 °C

• Se disuelven los residuos secos en 1 ml de la solución redisolvente diluida, se añade 1 ml de N-hexano, se mezcla durante 30 segundos; se centrifugan a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 5 min.
• Se extrae la capa superior y se toma 50 μl de solución de la capa inferior para su posterior análisis.

Doble de dilución de la muestra:1

5.2 Suero

1) Utilice un tubo centrífugo con heparina sódica (20-30 unidades/ ml de sangre) para recoger una muestra de sangre de pollo (Sugestión: se recomienda enjuagar las jeringas de recolección de sangre con heparina).Colocar la muestra de sangre a temperatura ambiente durante 1 horaDespués de obtener el plasma, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 10 minutos, extraer 1 ml de plasma.

2) Añadir CH₃CN (sin agua) 4 ml, mezclar cuidadosamente de arriba a abajo durante 5 minutos, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 10 minutos.

3) Trasladar el supernatante transparente (capa superior) a otro tubo centrífugo, añadir 2 ml de tampón PB de 0,02 M, mezclar uniformemente.

4) Añadir 5 ml de cloruro de metileno, mezclar uniformemente durante 5 min, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min en

15 °C durante 10 min, quitar la capa superior, llevar la fase orgánica inferior al frasco para secarlo ((claro sin impurezas), soplar para secarlo con nitrógeno o aire completamente por evaporación rotativa a 50 °C

5) Se disuelven los residuos secos en 1 ml de la solución redisolvente diluida, se añade 1 ml de N-hexano, se mezcla durante 30 segundos; se centrifugan a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 5 min.

6) Se absorben ligeramente las impurezas blancas de las capas superior y media, se toman 100 μl de fase inferior, se añade 100 μl de solución redisolvente diluida y se mezcla durante 30 segundos.

7) Se toma una solución de 50 μl para su posterior análisis.

Doble de dilución de la muestra:2

5.3- ¿ Qué quieres decir?

• Pesar 2,0 ± 0,05 g de muestra de miel en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 8 ml de acetonitril (CH)₃CN) - Cloruro de metileno- 0,1 M HCl solución de mezcla, agitar completamente durante 3 min, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 10 min.
• Se toman 2 ml de supernatante (capa superior), se soplan para secar con nitrógeno o aire a 56 °C.
• Se añade 1 ml de la solución redisolvente diluida, se agita completamente durante 1 minuto.
• Tomar 50 μL para su posterior análisis

Doble de dilución de la muestra:2