LSY-10056 Colistin ELISA Test Kit para la detección del tejido, del huevo, de la leche y de la alimentación

Colistin ELISA Test Kit

No. LSY-10056 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de Colistin en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. El Colistin en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos antis-Colistin. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Colistin en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de Colistin se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: ppb 1,5

Límite de detección

Tejido sobre 50ppb

Leche cruda sobre 60ppb

Leche acabada sobre 45ppb

Alimentación sobre 150ppb

Nota: ppb= ng/ml o ng/g

Tarifa del reacción cruzado

Colistin 100%

Tarifa de recuperación

el 90±30%

3. Componentes

• Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
• solución estándar 6× (1mL cada uno): 0ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb, 40.5ppb
• 11X concentró la conjugación de la enzima (0,7 ml)
• Dilución conyugal de la enzima (7 ml)
• Substrato A (7 ml)
• Substrato B (7 ml)
• Pare la solución (7 ml)
• 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba (30 ml)
• Redisolviendo la solución (50 ml)

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: el lector del microplate (450nm, 630nm), impresora, homogeneizador, dispositivo de la nitrógeno-sequedad, vórtice, coctelera, centrifugadora (4000g y arriba), midiendo mide con una pipeta, la balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora (25℃), contador de tiempo;
• Micropipettors: µL 20-200 µL monocanal, 100-1000, y µl del ocho-canal 30~300;
• Reactivo (AR): Agua desionizada, ácido clorhídrico, H₂ TAN₄, metanol, NaCl.

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

• Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
• Antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

• Muestra de tejido que extrae la solución: Tome el ácido clorhídrico 5ml, añada en el envase con 115ml desionizó el agua, entonces añaden NaCl 7.5g, lo disuelven y mezclan totalmente.
• Muestra de la leche que extrae la solución: Tome 2.8ml 98.3%H2SO4, añada en 250ml desionizó el agua, mezcla él uniformemente.
• Almacenador intermediario que se lava: 1 porción 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba + 19 porciones de agua desionizada.

5,1 preparación de las muestras

a) Tejido (pollo, pato)

1) Pese 1.0g±0.05g de la muestra homogeneizada (tejido) en el tubo de centrífuga plástico 50ml; Añada la muestra de tejido 1ml que extrae la solución y el metanol 2ml, utiliza el vórtice para 2min, centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min (nota: Vórtice inmediatamente después de añadir la solución y el metanol de extracción para evitar la aglomeración de la muestra);

2) Tome el líquido de la para arriba-capa 50ul, añada 450ul que redisuelve la solución, vórtice del uso para 20s;

3) Tome 50ul líquido para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 40

b) Leche cruda, leche acabada

1) Pese la muestra de la leche 1ml en el tubo de centrífuga plástico 4ml; Añada la muestra de la leche 1ml que extrae la solución y el metanol 1ml, utiliza el vórtice para 1min;

2) Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

3) Evite la suspensión de la para arriba-capa, tome el líquido claro de la para arriba-capa 50ul, añada 450ul que redisuelve la solución, vórtice del uso para 20s;

3) Tome 50ul líquido para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 30

c) Alimentación

1) Pese la muestra de la alimentación 1g en el tubo de centrífuga plástico 10ml; Añada la muestra de la leche 2ml que extrae la solución y el metanol 2ml, utiliza el vórtice para 1min;

2) Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

3) Tome el líquido claro de la para arriba-capa 50ul, añada 450ul que redisuelve la solución, vórtice del uso para 20s;

3) Tome 50ul líquido para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 80

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

1) Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;

2) Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;

3) La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en ELISA los procedimientos;

4) Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

• Saque todos los reactivo necesarios del equipo y del lugar en la temperatura ambiente (20 al ℃ 25) por lo menos 30 minutos. Observe que cada reactivo líquido se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar.
• Preparación conyugal de la enzima: tome la conjugación concentrada 11X de la enzima de 1 porción, añada 10 porciones de dilución conyugal de la enzima, dilúyalas en 1: 10.
• Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2-8, no congelado.
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones.
• Añada 50µL de la muestra o la solución estándar para separar pozos duplicados, entonces añade la conjugación de la enzima, µL 50 cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 en la oscuridad por 30 minutos.
• Vierta el líquido fuera de microwell, añada 250 µL/well del almacenador intermediario que se lava por 15-30 segundos, repita tres a cuatro veces, entonces aleta de secarse (si hay burbujas después del aleteo, las corta con las extremidades limpias).
• Coloración: añada la mezcla de 100 µL del substrato A y del substrato B en cada pozo (nota: el substrato A de la mezcla y el substrato B en el 1:1, la mezcla se deben utilizar en 10min, nunca envase del metal del uso o metal para revolver la solución, si no el substrato puede ser inválido.). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, e incube en el ℃ 25 por 15-20 minutos en la oscuridad para la coloración.
• Determinación: añada el µL 50 de la solución de la parada en cada uno bien (el color del substrato del azul a amarillear, significa que la parada tiene éxito). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo de 5 minutos).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados: primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de Colistin.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) de Colistin se puede obtener de comparar el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, el valor del OD de soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.5ppb, 1,415 para 1.5ppb, 0,74 para 4.5ppb, 0,313 para 13.5ppb, 0,155 para 40.5ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 13,5 a 40.5ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0,5 a 4.5ppb.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción se obtienen para el valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de la solución estándar y los valores del semilogarithm de la solución estándar de Colistin (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, finalmente obteniendo la concentración de Colistin en la muestra.

8.Precautions

1) Lea el manual cuidadosamente antes de usar;

2) Vuelva todos los reactivo en el equipo a la temperatura ambiente (25±2℃) (cerca de 1 hora) antes de usar;

3) Sacuda el reactivo uniformemente antes de usar, evite las burbujas al mezclarse;

4) Las extremidades están disponibles, evitar la cruz-contaminación, no repiten utilizan las extremidades;

5) No utilice los equipos de la prueba anticuados, no mezclan los reactivo del uso de diverso lote;

6) Pruebe la muestra inmediatamente después de la preparación de la muestra, si no puede afectar a resultados;

7) El substrato A y el substrato B son líquidos descoloridos y transparentes. Si llegan a ser azules antes de usar, o dan vuelta azul inmediatamente después de la mezcla, se contaminan o se deterioran los reactivo.

8) El muestreo de proceso debe ser rápido en la premisa de asegurar exactitud, para evitar la influencia de la diferencia del tiempo de reacción en los resultados de la prueba.

9) Pare la solución contiene el ácido sulfúrico. Si usted salpica accidentalmente en su piel o ropa, aclare inmediatamente con el un montón de agua. Si usted consigue accidentalmente en los ojos, vaya por favor al hospital para el examen después de la limpieza completa.

9. fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.