Estreptomicina verde ELISA Test Kit de la primavera para la detección de la seguridad de la miel manufacturada por Lvshiyuan

Estreptomicina ELISA Test Kit

No. LSY-10024-2 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo indirecto de la enzima para la detección de estreptomicina en la muestra. El antígeno de acoplamiento se cubre primero en las rayas micro-bien. La estreptomicina en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos antis de la estreptomicina. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra de prueba tiene una correlación negativa con la concentración de la estreptomicina en la muestra. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de la estreptomicina se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,1 ppb

Temperatura de la incubación: ℃ 25

Tiempo de la incubación: 30min-30min-15min

Límite de detección:

................................................................................................................................ Del tejido ppb 4

................................................................................................................................ De la miel ppb 2

Leche, leche en polvo ............................................................................................................. ppb 5

.................................................................................................................................. Del huevo ppb 10

Tarifa de recuperación:

Tejido, miel, leche, huevo ............................................................................................ los 85±15%

Tarifa del reacción cruzado:

Estreptomicina .................................................................................................................... 100%

Dihidroestreptomicina ....................................................................................................... 100%

Kalamycin .......................................................................................................................... 6,3%

Gentamycin ....................................................................................................................... 2,5%

3. Componentes

1. Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
2. solución estándar 6× (1 ml cada uno): 0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb
3. estándar de la Alto-concentración (1 ml): .......................................... casquillo rojo 1ppm
4. Casquillo rojo de la conjugación de la enzima (11 ml) ........................................................................................
5. Casquillo azul de la solución de funcionamiento del anticuerpo (5,5 ml) ........................................................................
6. Casquillo blanco de la solución del substrato A (6 ml) ....................................................................................
7. Casquillo negro de la solución del substrato B (6 ml) ....................................................................................
8. Pare el casquillo amarillo de la solución (6 ml) ..............................................................................................
9. 20× concentró el casquillo blanco del almacenador intermediario que se lavaba (40 ml) ...........................................................

10) 5× concentró la redisolución del casquillo amarillo de la solución (50 ml) ...................................................

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipos: el lector del microplate, impresora, homogeneizador, dispositivo de la nitrógeno-sequedad, vórtice, centrifugadora, midiendo mide con una pipeta, la balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g).
2. Micropipettors: 20~200 µL monocanal, µL 100~1000; y μl de varios canales 300;
3. Reactivo: NaOH, Na₂ HPO4·12H2O, NaH₂ PO4·2H2O, n-hexano, diclorometano (Cl₂), acetonitrilo (NC) del CH₃, ácido fosfórico (H₃ PO₄), ácido acético glacial, metanol del CH₂

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones (los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo)

1) Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para diversos reactivo;

2. Antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

1) los 0.05M PB Buffer: pese 12.9g Na₂ HPO₄·12H2O y 2.175g NaH₂ PO4·2H2O, añaden 1000mL desionizaron el agua para disolver.

2) ácido de los 0.04M Phosphoric (H₃ PO₄) (para la preparación de la miel): tome 1mL concentró el ácido fosfórico (H₃ PO₄), añaden el agua desionizada a 360mL.

3) solución del NaOH del 1M (para la preparación de la miel): pese NaOH 4g, añada el agua desionizada a 100mL.

4) Ácido acético glacial del 1% (para la preparación del huevo): tome a 1mL el ácido acético glacial, añada el agua desionizada 99mL, mézclela uniformemente.

5) Metanol del 70% (para la preparación del huevo): tome el metanol 700mL, añada el agua desionizada 300mL, mézclela uniformemente.

6) Redisolución de la solución: el 5×concentrated que redisuelve la solución se diluye con agua desionizada en el 1:4 (1mL concentró la redisolución de la solución + del agua desionizada 4mL), la solución de redisolución diluida puede almacenar en 4℃ para un mes.

5,1 tejido (pollo, cerdo, carne de vaca, cordero etc.)

1 toma 2±0.05 g homogeneizó la muestra (quite la grasa), añade 8mL los 0.05M PB Buffer, sacudida para 5min, lo puso en el baño de agua 56℃ para 30min;

Centrifugadora 2 en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente para 10 mínimos.

3 el líquido claro de la para arriba-capa de la toma 1ml en un nuevo buque, añade el n-hexano 1mL, lo mezcla uniformemente, centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente para 5min.

4 quite la fase orgánica de la para arriba-capa, toman el líquido de la abajo-capa 50ul, añaden 450µL la solución de redisolución diluida, mezcla correctamente por 30 segundos.

5 tome a 50 el µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: Límite de detección 40: 4ppb

5,2 miel, jalea real

1 pese la muestra de la miel 2±0.05g, añaden el ácido de 4mL los 0.04M Phosphoric (H3PO4)_, sacudida hasta disuelto completamente, centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para 5min, hasta claro (la muestra de la miel no necesita la centrifugadora, él puede ordenar para caminar 2).

2 añada el NaOH de 450ul el 1M y ajustar el valor de pH entre a 7 y a 9 (la necesidad de la jalea real de transferir todo el líquido claro de la para arriba-capa en un nuevo tubo de centrífuga limpio, y ajusta el valor de pH entre a 7 y a 9), centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para 5min, hasta claro.

3 tome el líquido claro de la para arriba-capa 50µL, añaden 450 el µL de la solución de redisolución diluida, mezcla uniformemente para 30s.

4 tome a 50 el µL para el análisis adicional.

Doblez del dilución de la muestra: Límite de detección 20: 2ppb

5,3 leche, leche en polvo

1 recoja la muestra 2±0.05g, añaden 8mL los 0.05M PB Buffer, sacudida para 5min, lo ponen en el baño de agua 56℃ para 30min;

Centrifugadora 2 en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente para 10 mínimos.

3 quite la grasa de la para arriba-capa, toman el líquido claro de la medio-capa 50ul, añaden 450µL la solución de redisolución diluida, mezcla correctamente por 30 segundos.

5 tome a 50 el µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: Límite de detección 50: 5ppb

5,4 huevo

1 los huevos fue pelado y homogeneizado, tome 1g±0.05g en un tubo de centrífuga 50mL, en primer lugar añaden 2mL del ácido acético glacial del 1%, sacudida para 2min, después añaden 7mL del metanol del 70%, sacudida para 2min, centrifugadora en 4000 r/min en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para 10min.

2 tome el líquido de la para arriba-capa 0.1mL en un tubo de centrífuga 1.5mL, añaden 0.9mL de la solución de redisolución diluida, mezcla uniformemente para 30s.

3 tome a 50 el µL para el análisis adicional.

Doblez del dilución de la muestra: Límite de detección 100: 10ppb

6. Procedimientos de ELISA

Instrucciones

1. Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (20-25℃).
2. Vuelva todos los reactivo a 2-8℃ inmediatamente después del uso.
3. La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia de

lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

4. Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

Procedimiento de la operación

1. Traiga el equipo de la prueba al minuto 30 de la temperatura ambiente (℃ 20-25) por lo menos, observe que cada reactivo se debe sacudir uniformemente antes de usar; ponga las tiras micro-bien requeridas en marcos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2-8, no congelado.
2. Preparación de la solución: 40mL diluídos del almacenador intermediario del lavado 20×concentrated con agua desionizada en el 1:19 (el almacenador intermediario concentrado 20× del lavado de 1 porción + 19 porciones desionizó el agua), o se preparan como cantidad necesaria;
3. Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones.
4. Añada el µL 50 de la muestra y de la solución estándar para separar pozos duplicados, entonces añada el µL 50 de la solución de trabajo del anticuerpo a cada pozo, sacuda correctamente, selle el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 para el minuto 30;
5. Vierta el líquido fuera de microwell, añada 350 µL/well del almacenador intermediario que se lava diluido, después saque, repita 5 veces, cada vez para 30s, en la aleta pasada de secarse con el papel absorbente (si hay las burbujas después del aleteo, córtelo con las extremidades limpias);.
6. Añada 100µL de la conjugación de la enzima a cada pozo, sacuda correctamente, selle el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 para el minuto 30; continúe como paso 5 para lavarse.
7. Coloración: añada 50 el µL de la solución del substrato A, entonces µL 50 de la solución de B en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, e incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración;
8. Determinación: añada 50 que el µL del para la solución en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD de cada pozo. (Recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630nm en el plazo del minuto 10).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de la estreptomicina.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) se puede obtener de comparar el valor medio del OD de la muestra de prueba con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, el valor del OD de soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.1ppb, 1,415 para 0.3ppb, 0,74 para 0.9ppb, 0,313 para 2.7ppb, 0,155 para 8.1ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 0,1 a 0.9ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 2,7 a 8.1ppb.

1. Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra de prueba y la solución estándar dividida por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicada posteriormente antes de 100%, de que es

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra de prueba o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de la solución estándar 0µg/L

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores semilogarithmic de las soluciones estándar de la estreptomicina (µg/L) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de prueba de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, finalmente obteniendo la concentración de la estreptomicina en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software)

8. Precauciones

1. La temperatura ambiente debajo de 25℃ o la temperatura de los reactivo y de las muestras de prueba que no son vueltos a la temperatura ambiente (20-25℃) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
2. La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable; Continúe tan al paso siguiente inmediatamente después del lavado.
3. Mézclese uniformemente, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
5. No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
6. Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
7. Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) de menos de 0,5 indica su degeneración.
8. La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: almacenado en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja