Sulfamethazine verde de la primavera (SM2) ELISA Kit para la miel 0.05ppb

Sulfamethazine (SM2) ELISA Kit para la miel

Catálogo no: EF58BJ1

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo indirecto de la enzima para la detección de residuo del Sulfamethazine (SM2) en muestra de la miel. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. El Sulfamethazine en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos del anti-Sulfamethazine. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Sulfamethazine en la muestra. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración del Sulfamethazine se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,05 ppb

Temperatura de la incubadora: 25℃

Tiempo de la incubadora: 30min~15min

Límite de detección

Miel ........................................................................................... 0,5 ppb

Tarifa del reacción cruzado

Sulfamethazine (SM2) ................................................................ 100%

Sulfamerazine (SM1) ........................................................................ los <1%

Sulfadimethoxine (SDM) ............................................................ los <1%

Sulfadiazine (SD o SDZ) ................................................................. los <1%

Sulfamonometoxina (SMM) ..................................................... el <1%

Sulfamethoxydiazine (SMD) ............................................................... los <1%

Sulfamethoxazole (SMZ) ........................................................ ..... el <1%

Sulfaguanidine (SG) .............................................................. ..... el <1%

Sulfathiazole (ST) ............................................................................ los <1%

Sulfaquinoxaline (SQX) ............................................................... el <1%

Sulfamethoxypyridazine (SMP) ................................................... el <1%

Tarifa de recuperación

Miel ...................................................................................... el 90% el ±30%

3. Componentes

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipos: el lector del microplate, impresora, homogeneizador, vórtice, centrifugadora, midiendo mide con una pipeta, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora
2. Micropipettors: µL 20-200 µL monocanal, 100-1000, y µL de varios canales 30-300;
3. Reactivo: NaOH, agua desionizada

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones (los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo)

1. Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
2. Antes del experimento, cada utensilio experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

Extracción del almacenador intermediario: 1 porción de 20× que extrae el almacenador intermediario + 19 porciones de agua desionizada, lo mezcla uniformemente;

5,1 miel

A. Method uno

1) Pese 1.0±0.05 g de la muestra homogeneizada de la miel en el tubo de centrífuga de 50 ml, añada 19 ml que extraen el almacenador intermediario, vórtice para el minuto 3;

2. Líquido del claro de la para arriba-capa 50µl de la toma para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 20

B. Method dos

1) Pese 1.0±0.05 g de la muestra homogeneizada de la miel en el tubo de centrífuga 15ml/50ml, añada 4 ml que extraen el almacenador intermediario, vórtice para el minuto 3;

2) Tome el líquido de la para arriba-capa 100µl, añada 300µl que extrae el almacenador intermediario, mézclelo uniformemente;

3. Tome 50µl sobre el líquido mezclado para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 20

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

1. Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;
2. Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;
3. La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA;
4. Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

1. Saque todos los reactivo y lugar necesarios en la temperatura ambiente (20-25 ℃) por lo menos 30min. Observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar;
2. Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en 2-8℃;
3. Preparación del almacenador intermediario que se lava: 15 ml diluídos del almacenador intermediario que se lava concentrado 20× con el agua desionizada en el 1:19 (almacenador intermediario concentrado 20× del lavado de 1 porción + 19 porciones de agua desionizada). O prepare el almacenador intermediario que se lava como cantidad necesaria.
4. Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones;
5. Añada el µL 50 de la muestra o la solución estándar a los pozos duplicados separados, añade el µL 50 de la conjugación de la enzima, después añade el µL 50 de la solución de trabajo del anticuerpo en cada pozo. Mézclese por la sacudida suavemente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el℃ 25 para el minuto 30;
6. Lave el microplate con el almacenador intermediario que se lava en 250 µL/well por cuatro a cinco veces; empape el pozo con el almacenador intermediario que se lava para el sec 15-30, aleta para secarse con el papel absorbente (si hay las burbujas después de agitar, las corta con las extremidades limpias);
7. Coloración: En primer lugar añada el µL 50 el µL de la solución del substrato A y entonces 50 de la solución de B en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente, e incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración;
8. Determinación: añada el µL 50 de la solución de la parada en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD. (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo del minuto 5).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido del Sulfamethazine en la muestra.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) obtuvo de la comparación el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, el valor del OD de soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.05ppb, 1,415 para 0.15ppb, 0,74 para 0.45ppb, 0,313 para 1.35ppb, 0,155 para 4.05ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 1.35ppb~4.05ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0.15ppb~0.45ppb. (multiplicado por el doblez correspondiente del dilución)

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de la solución estándar 0ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar del Sulfamethazine (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, finalmente obteniendo la concentración del Sulfamethazine en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software)

8. Precauciones

1. La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
2. La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable; Continúe tan al paso siguiente inmediatamente después del lavado.
3. Mézclese uniformemente, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
5. No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
6. Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
7. Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 (A450 nanómetro< 0="">

8. La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 1 año; la fecha de la producción está en la caja.

Nota: Si el envasado al vacío del microplate tiene salida, es todavía válido utilizar, no afecta al resultado de la prueba, sea relajarse para utilizar.

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