Primavera verde Metronidazole ELISA Test Kit para el análisis de la miel manufacturada por la biotecnología de Shenzhen Lvshiyuan

Metronidazole ELISA Test Kit (miel)

No. LSY-10048 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de Metronidazole en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. El Metronidazole en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos antis de Metronidazole. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Metronidazole en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de Metronidazole se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.05ppb

Límite de detección

Miel: sobre 0.1ppb

Nota: ppb= ng/ml o ng/g

Tarifa del reacción cruzado

Metronidazole .................................................................................. 100%

Ornidazole ........................................................................................ los 83%

Secnidazole ................................................................................... 110%

METRONIDAZOLE-OH ............................................................................ <1>

Tinidazole ......................................................................................... <1>

Dimetridazole .................................................................................... <1>

Tarifa de recuperación: el 90±30%

3. Componentes

1. Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
2. solución estándar 6× (1mL cada uno): 0ppb, 0.05ppb, 0.15ppb, 0.45ppb, 1.35ppb y 4.05ppb
3. Conjugación de la enzima (12 ml) ............................................................ 1 botella
4. Solución de funcionamiento del anticuerpo (7mL) .................................................... 1 botella
5. Solución del substrato A (7 ml) ............................................................ 1 botella
6. Solución del substrato B (7 ml) ........................................................... 1 botella
7. Pare la solución (7 ml) ...................................................................... 1 botella
8. 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba (30 ml) ....................................... 1 botella
9. Redisolviendo la solución (50 ml) ........................................................ 1 botella

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipos: el lector del microplate (450nm, 630nm), impresora, dispositivo de la nitrógeno-sequedad, vórtice, coctelera, centrifugadora (3000g y arriba), midiendo mide con una pipeta, la balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora (4℃, 25℃), baño de agua, contador de tiempo;
2. Micropipettors: µL 20-200 µL monocanal, 100-1000, y µl del ocho-canal 30~300;
3. Reactivo (AR): Na2HPO412H2O▪, NaH2PO4·2H2O, acetato de etilo, hexano, agua desionizada.

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

1. Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
2. Antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

1. Almacenador intermediario que se lava: 1 porción 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba + 19 porciones de agua desionizada.
2. almacenador intermediario de los 0.2M Phosphate: pese 25.8g Na2HPO412H2O▪, 4.350g NaH2PO4·2H2O, añaden 500ml desionizaron el agua para disolver totalmente.

5,1 preparación de la muestra

Miel

1) Pese la muestra de la miel de 2.0± 0.05g en el tubo de centrífuga plástico 50ml;

2) Añada el almacenador intermediario de 2ml los 0.2M Phosphate, entonces añada el acetato de etilo 8ml, sacuda fuertemente para 5min (o utilice el vórtice para 3min) para hacer el contacto de la muestra con fase orgánica totalmente;

3) Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

4) Líquido claro de la para arriba-capa de la transferencia 4ml en el tubo de centrífuga 5ml (nota: no tarde la fase del agua de la abajo-capa), soplo para secarse en el baño de agua 50-60℃;

5) Añada el hexano 1ml y 0.5ml que redisuelven la solución por consiguiente, sacuda fuertemente para 2min (o utilice el vórtice para 1min);

6) Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

7) Deseche la fase orgánica de la para arriba-capa, tome el líquido de la abajo-capa 50ul para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 0,5

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

1) Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;

2) Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;

3) La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en ELISA los procedimientos;

4) Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

1. Traiga el equipo de la prueba al minuto 30 de la temperatura ambiente (℃ 20-25) por lo menos, observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar, ponga las tiras micro-bien requeridas en marcos de la placa. Reselló el microplate inusitado, tienda en el ℃ 2-8, no congelado.
2. Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces, registran sus posiciones.
3. Añada el µL 50 de la muestra o de la solución estándar en pozos duplicados separados; entonces añada 50 el µL de la solución de funcionamiento del anticuerpo en cada pozo, mezcla suavemente sacudiendo la placa manualmente. Selle el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 4 para 60min en oscuridad.
4. Vierta el líquido fuera de microwell, añada 250 µL/well del almacenador intermediario que se lava para lavar el microplate para 15-30 s, entonces vierta el almacenador intermediario que se lava fuera de microwell, añada el almacenador intermediario que se lava para lavarse de esta manera por 3-4 veces, después tome hacia fuera y agite para secarse con el papel absorbente.
5. Añada la conjugación de la enzima 100ul (no ponga el microplate en la temperatura ambiente por hora larga después de paso que se lava de evitar la sequedad de la ventaja del microplate a la diferencia del resultado), mezcla suavemente sacudiendo la placa manualmente. Selle el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 para 20min en oscuridad. Lavado como paso 4.
6. Coloración: añada la mezcla 100ul de solución del substrato A y de solución del substrato B en cada pozo (nota: la solución del substrato A de la mezcla y la solución del substrato B en el 1:1, utilizan la mezcla en 10min, no utilizan el metal para contener o para revolver, para evitar el substrato inválido). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, sello que el microplate con la membrana de la cubierta entonces incuba en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración.
7. Determinación: añada 50 que el µL del para la solución en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Parada con éxito cuando color del substrato del azul a amarillear. Recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo de 5 minutos.

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados: primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de Metronidazole.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) de Metronidazole se puede obtener de comparar el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, el valor del OD de soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.05ppb, 1,415 para 0.15ppb, 0,74 para 0.45ppb, 0,313 para 1.35ppb, 0,155 para 4.05ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 1,35 a 4.05ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0,05 a 0.45ppb.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción se obtienen para el valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de la solución estándar y los valores del semilogarithm de la solución estándar de Metronidazole (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, finalmente obteniendo la concentración de Metronidazole en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software).

8. Precauciones

1. La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
2. La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable; Continúe tan al paso siguiente inmediatamente después del lavado.
3. Mézclese uniformemente, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
5. No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversas porciones para utilizar.
6. Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La solución estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
7. Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) de menos de 0,5 indica su degeneración.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.

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