LSY-10034 Kit de detección de ocratoxina A ELISA Prueba de micotoxinas de 0,1 ppb

OcratoxinaA(OTA)ELISAKit de prueba

N.º de catálogo LSY-10034

1. Principio y uso

La ocratoxina es un metabolito secundario producido por ciertas especies del género Aspergillus y Penicillium.Entre ellas, la ocratoxina A es la más ampliamente distribuida en la naturaleza, tiene la toxicidad más fuerte y tiene el mayor impacto en humanos, animales y plantas.

El kit utiliza ELISA competitivo indirecto para detectar ocratoxinas (Ocratoxinas A, OTA) en cereales y muestras de piensos como fideos de arroz, maní y soja.El kit consta de una placa de antígeno prerevestida y un conjugado enzimático, anticuerpos, estándares y otros reactivos de soporte.Durante la prueba, se agrega la solución estándar o de muestra, la ocratoxina en la muestra y el antígeno prerrevestido en la placa para competir contra el anticuerpo de ocratoxina, y después de agregar el conjugado enzimático, a través del sustrato TMB se muestran los valores de color y absorbancia de la muestra. ​de ocratoxina tiene una correlación negativa con su contenido, en comparación con la curva estándar y luego multiplicada por el factor de dilución correspondiente, puede extraer el contenido de ocratoxina en las muestras.

2.Especificaciones técnicas

Sensibilidad:0,1 ppb (ng/ml)

Incubación:37℃, 30min~30min~15min

Límite de detección:

Grano…………………………………………………….…1ppb

Alimentación …………………………………………………….…2ppb

Tasa de reacción cruzada

Ocratoxina A …………………………………………………………100%

Índice de recuperación:

Granos, piensos …………………………………………………………85±15%

3. Componentes

4. Materiales necesarios pero no proporcionados.

1)Equipo:Lector de ELISA (450 nm/630 nm), impresora, vórtex (agitador opcional), centrífuga, balanza: sensible a la cantidad de 0,01 g, pipetas graduadas, homogeneizador;

2)Micropipetas:monocanal 20 ml ~ 200 ml, 100 ml ~ 1000 ml, multicanal 300 ml

3)Reactivos:Metanol, NaHCO₃, agua desionizada

5.Pretratamiento de muestra

5.1Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

• 70%Metanol

7 partes de Metanol + 3 partes de agua desionizada;

• NaHCO3 0,1 M₃solución

Pesar 4,2 g de NaHCO₃, añadir agua desionizada para disolver hasta 500 ml;

3) Tampón de lavado

1 parte de tampón de lavado concentrado 20X y disolver con 19 partes de agua desionizada para obtener el tampón de lavado listo para usar.

5.2Preparación deGranos (arroz, maíz, metroillet, etc.)

1) Pesar 2 g de muestra homogénea en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 10 ml de metanol al 70 %, agitar durante 5 minutos, centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 minutos;

2) Tome 1 ml de líquido transparente de capa superior, agregue 1 ml de solución de NaHCO₃ 0,1 M y agite uniformemente;

3) Tome 50ul de líquido para probar.

Factor de dilución:10Límite de detección:1ppb

5.3Preparación de Fnecesitar

1) Pesar 2 g de muestra homogénea en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 20 ml de metanol al 70 %, agitar durante 5 minutos, centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 minutos;

2) Tome 1 ml de líquido transparente de capa superior, agregue 1 ml de solución de NaHCO₃ 0,1 M y agite uniformemente;

3) Tome 50ul de líquido para probar.

Factor de dilución:20Límite de detección:2ppb

6. Procedimientos ELISA

1).Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos, el tampón de lavado concentrado 20X puede cristalizar cuando se almacena en frío, es necesario volver a temperatura ambiente para disolverse por completo;tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse uniformemente antes de su uso;Coloque las tiras de micropocillos necesarias en marcos de placas.Vuelva a sellar la microplaca no utilizada, guárdela a 2-8 ℃,no congelado.

2).Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.

3).Agregue estándar/muestra: agregue 50 µL de la muestra o la solución estándar en pocillos duplicados separados, luego agregue la solución de trabajo de anticuerpos, 50 µL/pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cobertura,incubar a los 37℃durante 30 minutosen la oscuridad.

4).Lavar la microplaca: abra con cuidado la tapa y vierta el líquido del micropocillo;agregue 350 µL/pocillo de tampón de lavado, lave completamente 5 veces, 30 s cada vez, luego saque y agite para secar con papel absorbente. (Use una lanza sin usar para perforar la burbuja después de secar).

5).Añadir conjugado enzimático: añadir conjugado enzimático, 100 µl/pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cobertura,incubar a los 37℃para30 minutosen la oscuridad.

Lave como el paso 4).

6).Coloración: agregue 50 µL de sustrato A y luego 50 µL de sustrato B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar a los 37℃durante 15 minutosen eloscuro para la coloración.(Si el color azul es demasiado claro, el tiempo de reacción se puede ampliar adecuadamente)

7. Determinación: añadir 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD de cada pocillo.(Se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 10 minutos).

7. Juicio de resultado

Para calcular la concentración de las muestras se debe realizar una curva estándar.Antes de realizar la curva estándar, se debe conocer el concepto de % de absorbancia.

Cálculo del % de absorbancia:

B: el valor OD promedio de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

De este modo, el estándar cero se iguala al 100 % y los valores de absorbancia se expresan en porcentajes.Los valores calculados para los estándares se introducen en un sistema de coordenadas en papel cuadriculado semilogarítmico frente a la concentración de ocratoxina A [μg/kg].La concentración de ocratoxina A en μg/kg (ppb) correspondiente a la absorbancia de cada muestra se puede leer en la curva de calibración.

Un software especial para el análisis de resultados de ELISA facilitará determinaciones dobles o múltiples.Si lo necesita, llame para solicitarlo.

8.Precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.

2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada;así que continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.

3. Mezcle uniformemente antes de agregar cualquier reactivo.

4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.

5. No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.

6. Almacenamiento: almacenar a 2-8 ℃, no congelado.Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.

7. Desechar la solución colorante con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección (450/630 nm) de la solución estándar 0 (0 ppb) inferior a 0,5 ((A450 nm <0,5)) indica su degeneración.

9.Fecha de almacenamiento y caducidad.

Almacenamiento: conservar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad: 12 meses;la fecha de producción está en la caja.

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