Total de aflatoxinas en los cultivos de granos, piensos, maíz, trigo, chile, aceite 96 pozos

En totalKit de ensayo ELISA para la aflatoxina

No de catálogo LSY-10029

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo indirecto para la detección de la aflatoxina total.La aflatoxina en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por los anticuerpos anti-aflatoxinaEl valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la aflatoxina en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y se obtienen los residuos de aflatoxina..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.02Pb y p

Temperatura de la incubadora: 25°C

Tiempo de la incubadora: 30min15min

Límites de detección:

Alimentos para animales, arroz, maíz, cacahuetes, tejido, aceite comestible

Tasa de reacciones cruzadas:

Aflatoxina B1...... 100%

Aflatoxina M1......91,2%

Aflatoxina B2...680,4%

Aflatoxina G1.......40,7%

Aflatoxina G2...20,7%

Tasa de recuperación:

Alimentos para animales, arroz, maíz, cacahuetes, tejido, aceite comestible

• Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1) Equipo:Lector ELISA (450 nm/630 nm), homogeneizador, agitador, centrífuga, balanza: 0,01 g sensible a la cantidad, dispositivo de secado de nitrógeno, incubadora, pipetas graduadas, impresora

2) Micropipetas:de un solo canal 20 ml ~ 200 ml, de 100 ml ~ 1000 ml, de varios canales 30 ∼ 300 μl

3) Reactivos:El metanol, el n-hexano.

• Pre-tratamiento de las muestras

Instrucciones(Los siguientes puntos deben tratarse antes del pretratamiento)

• Sólo se podrán utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.

2) Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1) Muestrasolución de redisolución

Se utilizará 1 parte de una solución de redisolución concentrada 20X y se disolverá con 19 partes de agua desionizada para obtener la solución de redisolución de la muestra lista para el uso.

2) Solución de extracto de muestra

Se utilizarán 7 partes de metanol y se disolverán con 3 partes de agua desionizada para obtener la solución de extracto de muestra lista para el uso.

Preparación de las muestras

• Preparación deel tejido,f- ¿ Qué?, arroz y maízmuestra

• Se toma una muestra molida de 1,0 ± 0,05 g en un tubo centrífugo de 50 ml, se añade 5 ml de solución de extracto de muestra, se agita durante 3 minutos y se centrifuga a una temperatura superior a 4000 r/min a 20 °C durante 10 minutos.
• Se toma un supernatante de 100 ul, se añade una solución redissolvente de 700 ul, se agita hasta que sea uniforme.
• Tomar 50 μl para el ensayo

Factor de dilución:40

• Preparación deaceite comestiblemuestra

• Tomar una muestra de aceite comestible de 1,0 ± 0,05 g en un tubo centrífugo de 50 ml; añadir 5 ml de solución de extracto de muestra, luego añadir 4 ml de n-hexano, agitar durante 3 minutos, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 20 °C durante 10 minutos;
• Desechar el supernatante, tomar 100ul del líquido de la capa media, añadir7- ¿Qué es eso?Solución de redisolución de la muestra, agitada hasta que sea uniforme.
• Tomar 50 μl para el ensayo

Factor de dilución:40

• Preparación deel manímuestra

1) Se toma una muestra de 1.0±0.05 g de cacahuete molido en un tubo centrífugo de 50 ml; se añade 5 ml de solución de extracto de muestra, luego se añade 4 ml de n-hexano, se agita durante 3 minutos, se centrifuga a una temperatura superior a 4000 r/min a 20 °C durante 10 minutos;

• Desechar el supernatante, tomar 100ul del líquido de la capa media, añadir4- ¿Qué es eso?Solución de redisolución de la muestra, agitada hasta que sea uniforme.
• Tomar 50 μl para el ensayo

Factor de dilución:25

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1. Los reactivos de ELISA deben ponerse a temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de su uso.

2Colocar de nuevo los reactivos ELISA a 2-8 °C inmediatamente después de su uso

3. La reproducibilidad del ELISA en el proceso de análisis depende en gran medida de la consistencia de la placa de lavado, el correcto funcionamiento de la placa de lavado es el punto de determinación del programa ELISA

4En todo el proceso de incubación a temperatura constante, evitar la exposición a la luz, sellar la microplaca con la membrana de cubierta

6. 2Procedimientos de funcionamiento

1. Colocar el kit de ensayo a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos, teniendo en cuenta que cada reactivo debe agitarse uniformemente antes de su uso;

2Coloque las tiras de micro-pozo requeridas en los marcos de las placas, vuelva a sellar la microplaca no utilizada, guarde a 2-8 °C, no congelada.

3Preparación de la solución: tomar 40 ml de tampón de lavado concentrado 20×, disolver con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado 20× + 19 partes de agua desionizada),o prepararse según la cantidad necesaria.

4- Numeración: numeración de los micro pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; registrar sus posiciones.

5. Añadir muestra estándar: añadir 50 μL de la muestra o la solución estándar en pozos duplicados separados, luego añadir conjugado enzimático, 50 μL/pozo; luego solución de trabajo de anticuerpos, 50 μL/pozo.Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cubierta,Incubación a los 25 años°Cdurante 30 minutos en la oscuridad.

6. Lavar la microplaca: abrir cuidadosamente la membrana de la cubierta, verter líquido fuera de la microcuenca; añadir 250 μL/pozo de amortiguador de lavado, lavar completamente durante 4-5 veces, 15-30 s cada vez,luego sacar y doblar para secar con papel absorbente.(Use una lanza no utilizada para perforar la burbuja después de secar)

7. Coloración: añadir 50 μL de solución de sustrato A y luego 50 μL de solución de B en cada pozo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yIncubación a los 25 años°Cdurante 15 minutos en la oscuridad para colorear.

8. Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente. Establecer la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD de cada pozo.(Se recomienda leer el valor de OD a la longitud de onda dual 450/630 nm en un plazo de 5 minutos).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con la aflatoxina total en la muestra

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ppb) se puede obtener comparando el valor medio de absorbancia con los estándares.3La muestra dos es 1.0, y los estándares son: 0ppb de 2.243; 0,02 ppm de 1.816; 0,06 ppm de 1.415- 0,18 ppm de 0.74; 0,54 ppm de 0.313; 1,62 ppm de 0.155Entonces la concentración de la muestra uno está en el rango de 0.54ppb ~ 1.62ppb; la muestra dos es 0.06ppb ~ 0.18ppb.El rango de concentración de la aflatoxina total en las muestras se puede obtener multiplicando por la dilución correspondiente de la muestra..

7. 2 Análisis cuantitativo

Para calcular la concentración de las muestras, debe hacerse una curva estándar, antes de hacer la curva estándar, debe conocerse el concepto de absorción en %.

Cálculo del porcentaje de absorción:

B­el valor medio de OD de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Así, la norma cero se hace igual al 100% y los valores de absorción se indican en porcentaje.Los valores calculados para las normas se introducen en un sistema de coordenadas en papel gráfico semilogarítmico en función de la concentración total de aflatoxina [ng/L]La concentración total de aflatoxinas en ng/l (ppb) correspondiente a la absorbancia de cada muestra se puede leer a partir de la curva de calibración.

Un software especial para el análisis de resultados de ELISA facilitará las determinaciones dobles o múltiples.

8Las precauciones

1La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.

2La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada por situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.

3. Mezclar uniformemente antes de añadir cualquier reactivo.

4La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.

5No utilice el kit después de su fecha de caducidad. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y los valores de detección de la dosis.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.

6. Almacenamiento: almacenar a 2-8 °C, no congelado. Colocar la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla. La sustancia estándar y el primer color incoloro son sensibles a la luz,y por lo tanto no pueden ser expuestos directamente a la luz.

7El valor de detección de la solución estándar 0 (0 ppb) es inferior a 0,5. El valor de detección de la solución estándar 0 (0 ppb) es inferior a 0,5.5)) indica su degeneración.

8La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

Almacenamiento: conservar a una temperatura de 2-8 °C, sin congelar.

Fecha de expiración: 12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.