PA30A\01 Un kit para el diagnóstico de enfermedades bovinas mediante PCR para la fiebre aftosa 50T/kit Kit de prueba de ácido nucleico del virus de la fiebre aftosa-universal (FMDV-U) (RT-PCR fluorescente)

Kit de prueba de ácido nucleico del virus de la fiebre aftosa-universal (VFA-U)

(RT-PCR fluorescente)

[Descripción general del producto]

Este producto es un kit de prueba de ácido nucleico qRT-PCR de un solo paso diseñado para la detección auxiliar de ácido nucleico de VFA en muestras. Se han desarrollado cebadores específicos y una sonda fluorescente específica dirigidos a la región conservada del gen 3D del VFA; la sonda está marcada con el colorante fluorescente FAM. Cuando se combina con la mezcla de reacción qRT-PCR, este kit permite la detección rápida de ácido nucleico de VFA-U utilizando un instrumento de PCR cuantitativa fluorescente.

El kit incluye un control positivo y un control negativo. El control positivo consiste en un plásmido que contiene el fragmento de amplificación, utilizado para evaluar la validez del ensayo; el control negativo se utiliza para detectar la presencia de contaminación en el sistema de reacción.

[Composición del producto]

[Condiciones de almacenamiento]

Almacenar a -20 °C, protegido de la luz; vida útil: 12 meses.

[Instrumentos aplicables]

Instrumentos de PCR fluorescente en tiempo real, como ABI 7500, Bio-Rad CFX96 y SLAN®-96P.

[Requisitos de la muestra]

• Se requiere que los clientes proporcionen sus propios reactivos: solución salina normal.
• El suero recolectado, la piel de ampolla, el líquido de ampolla y otras muestras deben almacenarse y transportarse a 2–8 °C y enviarse rápidamente para pruebas de laboratorio. Alternativamente, las muestras pueden conservarse en medio de transporte viral y luego enviarse al laboratorio para su análisis.

Nota: Las muestras enviadas para análisis deben ser frescas; se prohíben estrictamente los ciclos repetidos de congelación-descongelación.

• Se recomienda utilizar un kit comercial de extracción de ácido nucleico viral para la extracción y purificación de ARN; el ARN extraído se puede utilizar directamente para la detección. Si las muestras no se analizan inmediatamente después de la extracción, se pueden almacenar a -80 °C para su uso posterior; sin embargo, se deben evitar los ciclos repetidos de congelación-descongelación.

[Pasos de operación]

• Procesamiento de muestras – Extracción de ARN viral (Este kit no incluye reactivos de procesamiento de muestras)

Se recomienda realizar el pretratamiento de la muestra de acuerdo con estándares como "GB/T 18935-2018 Técnicas de diagnóstico para el virus de la fiebre aftosa" y "NY/T 541-2016 Especificaciones técnicas para el muestreo, conservación y transporte de muestras de diagnóstico veterinario", y utilizar kits comerciales de extracción de ácido nucleico para extraer ácidos nucleicos de las muestras.

1). Procesamiento de muestras de tejido: Tomar aproximadamente 1 g de muestra de tejido, cortarla en trozos pequeños con tijeras quirúrgicas y mezclar bien; luego tomar 0.05 g de la muestra de tejido y colocarla en un mortero, agregar 1.5 mL de solución salina normal y continuar moliendo; una vez homogeneizada, transferir la mezcla a un tubo de centrífuga estéril de 1.5 mL, centrifugar a 8,000 g durante 2 minutos y recoger 100 μL del sobrenadante en otro tubo de centrífuga estéril de 1.5 mL.

2). Procesamiento de muestras de suero: Transferir 100 μL de muestra de suero a un tubo de centrífuga estéril de 1.5 mL.

3). Procesamiento de muestras de medio de cultivo celular: Transferir 100 μL de medio de cultivo celular directamente a un tubo de centrífuga estéril de 1.5 mL.

4). El ARN viral se extrajo utilizando un kit comercial de extracción de ARN.

[Notas adicionales]

• La secuencia objetivo detectada por este kit de ensayo es una región conservada del 3D del VFA. Sin embargo, si el virus sufre una mutación genética en esta secuencia objetivo, pueden ocurrir resultados falsos negativos.
• Los resultados de las pruebas dependen de las condiciones de recolección, almacenamiento y transporte de las muestras; los errores en cualquiera de estas etapas pueden conducir a resultados falsos negativos; por el contrario, la contaminación cruzada durante el manejo de la muestra puede dar lugar a resultados falsos positivos.
• Este producto está destinado únicamente a fines de investigación. Antes de usar, lea atentamente las instrucciones de este kit y siga estrictamente los procedimientos de operación.
• El personal que realiza experimentos y que ha recibido capacitación profesional debe usar equipo de protección y realizar sus operaciones dentro de un laboratorio equipado con las salvaguardias de seguridad apropiadas.
• El kit de reactivos debe almacenarse protegido de la luz para evitar la degradación de los compuestos fluorescentes. Todos los consumibles utilizados, incluidos los tubos de centrífuga y las puntas, deben ser esterilizados en autoclave y estar libres de DNasa y RNasa.
• Las muestras de prueba involucradas en este kit se considerarán que contienen sustancias infecciosas; todas las operaciones y procedimientos de manejo deben cumplir con los requisitos relevantes de las "Directrices generales de bioseguridad para laboratorios microbianos y biomédicos" emitidas por el Ministerio de Salud y las "Regulaciones sobre la gestión de residuos médicos".