LSY-10048 Kit ELISA de metronidazol para análisis de miel

Kit de prueba ELISA de metronidazol(Miel)

Número de catálogo LSY-10048

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de metronidazol en la muestra.Los antígenos de acoplamiento están recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos.El metronidazol de la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las tiras de los micropocillos compiten por los anticuerpos anti-metronidazol.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el metronidazol que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de Metronidazol.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.05ppb

Límite de detección

Miel: aproximadamente 0,1 ppb

Nota: ppb= ng/ml o ng/g

Tasa de reacción cruzada

Metronidazol 100%

Ornidazol 83%

Secnidazol 110%

Metronidazol-OH <1%

Tinidazol <1%

Dimetridazol <1%

Índice de recuperación: 90±30%

3. Componentes

• Tiras de micropocillos: 12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una
• Solución estándar 6× (1 ml cada una): 0 ppb, 0,05 ppb, 0,15 ppb, 0,45 ppb, 1,35 ppb y 4,05 ppb
• Conjugado enzimático (12 mL) 1 frasco
• Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml) 1 botella
• Solución de sustrato A (7 mL) 1 botella
• Solución de sustrato B (7 mL) 1 botella
• Solución de parada (7 ml) 1 botella
• Tampón de lavado concentrado 20× (30 ml) 1 botella
• Solución redisolunte (50 mL) 1 botella

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos:lector de microplacas (450 nm, 630 nm), impresora, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, agitador, centrífuga (3000 gy superior), pipetas medidoras, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora (4 ℃, 25 ℃), baño de agua , Temporizador;
• Micropipetas:un solo canal de 20 a 200 µl, 100 a 1000 µl y ocho canales de 30 a 300 µl;
• reactivos(ARKANSAS):Na2HPO4▪12H2O,NaH2PO4·2H2O,acetato de etilo, hexano, agua desionizada.

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra se deben abordar los siguientes puntos:

• Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;
• Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

• Tampón de lavado: 1 parte de tampón de lavado concentrado 20× + 19 partes de agua desionizada.
• 0.Tampón de fosfato 2M: pesar 25,8 g Na2HPO4▪12H2O, 4,350 g NaH2PO4·2H2O, añadir 500 ml de agua desionizada para disolver completamente.

5.1 Preparación de muestras

Miel

1) Pesar 2,0 ± 0,05 g de muestra de miel en un tubo de centrífuga de plástico de 50 ml;

2) Añadir 2ml0.Tampón de fosfato 2M, luego agregue 8 ml de acetato de etilo, agite fuertemente durante 5 minutos (o use un vórtex durante 3 minutos) para que la muestra entre en contacto completamente con la fase orgánica;

3) Centrifugar a más de 3000 ga temperatura ambiente durante 5 minutos;

4) Transfiera 4 ml de líquido transparente de capa superior a un tubo de centrífuga de 5 ml (nota: no tome la fase acuosa de la capa inferior), secar con secador en un baño de agua a 50-60 ℃;

5) Agregue 1 ml de hexano y 0,5 ml de solución de redisolución en consecuencia, agite fuertemente durante 2 minutos (o use un vórtex durante 1 minuto);

6) Centrifugar a más de 3000 ga temperatura ambiente durante 5 minutos;

7) Deseche la fase orgánica de la capa superior y tome 50 ul de líquido de la capa inferior para realizar la prueba.

Pliegue de dilución de la muestra:0.5

6. Procedimientos ELISA

6.1Instrucciones

1) Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25 ℃) antes de su uso;

2) Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso;

3) La reproducibilidad del análisis ELISA depende, en gran medida, de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos ELISA;

4) Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

6.2Operaciónprocedimientos

• Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos, tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de usarlo, coloque las tiras de micropocillos requeridas en los marcos de las placas.Vuelva a sellar la microplaca no utilizada, guárdela a 2-8 ℃, no congelada.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado, registre sus posiciones.
• Agregue 50 µL de la muestra o solución estándar en pocillos duplicados separados;luego agregue 50 µL de la solución de trabajo del anticuerpo en cada pocillo, mezcle suavemente agitando la placa manualmente.Selle la microplaca con la membrana de cubierta yincubar en4℃ para60min en la oscuridad.
• Vierta el líquido del micropocillo, agregue 250 µL/pocillo de tampón de lavado para lavar la microplaca durante 15 a 30 s, luego vierta el tampón de lavado del micropocillo, agregue tampón de lavado para lavar de esta manera durante 3 a 4 veces, luego retire y agite secar con papel absorbente.
• Agregue 100 ul de conjugado enzimático (no coloque la microplaca a temperatura ambiente durante mucho tiempo después del paso de lavado para evitar que la microplaca se seque y provoque diferencias en los resultados), mezcle suavemente agitando la placa manualmente.Selle la microplaca con la membrana de cubierta yincubar en25℃para20min en la oscuridad.Lavado como paso 4.
• Coloración: agregue 100 ul de una mezcla de solución de sustrato A y solución de sustrato B en cada pocillo (Nota: mezcle la solución de sustrato A y la solución de sustrato B a 1:1, use la mezcla en 10 minutos, no use metal para contener ni agitar, para evitar que el sustrato inválido).Mezcle suavemente agitando la placa manualmente, selle la microplaca con la membrana protectora y luegoincubar a 25 ℃ durante 15 min en la oscuridad para colorear.
• Determinación: añadir 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Deténgase correctamente cuando el color del sustrato pase de azul a amarillo.Se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 5 minutos.

7. Juicio de resultados

Hay dos métodos para juzgar los resultados: el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de DO de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de metronidazol.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) de metronidazol se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestraⅠ es 0,3 y el de la muestraⅡ es 1,0, el valor de DO de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,05 ppb, 1,415 para 0,15 ppb, 0,74 para 0,45 ppb, 0,313 para 1,35 ppb , 0,155 para 4,05 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestraⅠ es de 1,35 a 4,05 ppb, y el de la muestraⅡ es de 0,05 a 0,45 ppb.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia se obtienen para el valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar dividido por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir,

B: el valor OD promedio de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de la solución estándar y los valores de semilogaritmo de la solución estándar de metronidazol (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.Posteriormente el valor resultante se multiplica por el factor de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de Metronidazol en la muestra.

Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software).

8. Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada;Continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
• Mezcle uniformemente, de lo contrario habrá una reproducibilidad no deseada.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes lotes a utilizar.
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La solución estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) inferior a 0,5 indica su degeneración.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;la fecha de producción está en la caja.