Equipo de prueba ELISA de oxitetraciclina LSY-10044 para tejidos, miel, leche y piensos

Kit de prueba ELISA de oxitetraciclina

Número de catálogo LSY-10044

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de oxitetraciclina en la muestra.Los antígenos de acoplamiento están recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos.La oxitetraciclina de la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por el anticuerpo anti-oxitetraciclina.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la oxitetraciclina que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de Oxitetraciclina.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.4ppb

Temperatura de incubación: 25 ℃

Tiempo de incubación: 30 minutos—15 minutos

Límite de detección:

Tejido, miel aproximadamente 20 ppb

Leche (método 1) aproximadamente 20 ppb

Leche (método 1) aproximadamente 40 ppb

Alimenta alrededor de 600 ppb

Nota: ppb=ng/ml o ng/g

Tasa de reacción cruzada:

Oxitetraciclina 100%

Tetraciclina 200%

Clortetraciclina 240%

Doxiciclina 20%

Índice de recuperación:90±15%

3. Componentes

• Tiras de micropocillos: 12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una
• Solución estándar concentrada 10×: 0 ppb, 4 ppb, 12 ppb, 36 ppb, 108 ppb (0,5 ml/botella)
• Conjugado enzimático (7 ml)
• Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml)
• Sustrato A (7 mL)
• Sustrato B (7 mL)
• Solución de parada (7 ml)
• Tampón de lavado concentrado 20X (30 ml)
• Solución redisoludora concentrada 20X (10 ml)

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos: lector de microplacas (450 nm, 630 nm), evaporador rotatorio/dispositivo de secado de nitrógeno, homogeneizador, oscilador, centrífuga (4000 gy superior), balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), pipetas medidoras, incubadora (ajustable a 25 ℃, 37 ℃, 60 ℃), temporizador
• Micropipetas: monocanal 20~200 µL y 100~1000 µL, y multicanal 30~300 µL;
• reactivos: agua desionizada, HCl, N,N-Dimetilformamida(DMF)

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra se deben abordar los siguientes puntos:

1) Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

• Diluya la solución de redisolución concentrada 20X con agua desionizada a 1:19 (1 parte de solución de redisolución concentrada + 19 partes de agua desionizada).
• Tampón de lavado: 1 parte de tampón de lavado concentrado 20× + 19 partes de agua desionizada
• HCl 1 M: tome 1 ml de HCl concentrado, agregue 11 ml de agua desionizada para disolverlo y mezclarlo uniformemente.

5.1Tejido

• Tome 1 ± 0,01 g de la muestra homogeneizada en un tubo de centrífuga de 10 ml, agregue 1 ml de N, N-dimetilformamida (DMF), agite con un oscilador durante 5 minutos para que la muestra esté completamente dispersa y en contacto total con la fase orgánica.
• Centrifugar a más de 4000 g durante 10 minutos.
• Tome 100 ul de líquido transparente de capa superior, agregue 900 ul de solución redisoludora diluida, agite con un oscilador durante 10 minutos;
• Tome 50 l para el análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:20

5.2 Miel

1) Tome 1 ± 0,01 g de muestra de miel en un tubo de centrífuga de 10 ml;Agregue 2 ml de agua desionizada, agite completamente con el oscilador durante 1 minuto para que se disuelva;tome 100 ul de solución disuelta, agregue 400 ul de solución redisoludora diluida, oscilador durante 10 segundos para mezclarlo uniformemente;

2) Tome 50ul para análisis inmediatamente.

Pliegue de dilución de la muestra:10

5.3 Leche (método 1)

1) Descongele la muestra de leche líquida recolectada y luego déjela a temperatura ambiente durante 30 minutos;

2) Coloque las puntas en la capa inferior de leche, tome 1 ml de muestra en un tubo de centrífuga de 2 ml (nota: no tome la crema de la capa superior);

3) Agregue 50 ul de HCl 1 M, agite fuertemente durante 1 minuto (u oscilador durante 30 segundos);

4) Centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente (20 - 25 ℃) durante 10 minutos;

5) Tome 50 ul de líquido transparente de la capa superior en otro tubo de centrífuga limpio (nota: no tome la crema de la capa superior), agregue 450 ul de solución redisoludora diluida, agite fuertemente durante 1 minuto (u oscilador durante 30 segundos);

6) Tomar 50ul para análisis inmediatamente.

Pliegue de dilución de la muestra:10

Leche (método 2)

1) Tome 50 ul de muestra líquida en 1950 ul de solución redisoludora diluida;oscilador completamente durante 1 minuto de manera uniforme;

2) Tome 50ul para análisis inmediatamente.

Pliegue de dilución de la muestra:40

5.4 Piensos (piensos para ganado, piensos para cerdos)

1. Tome 1 ± 0,01 g de muestra de alimento en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregue 5 ml de agua desionizada, agite con un oscilador durante 2 minutos hasta que la alimentación se separe por completo, centrifugue a más de 4000 r/min durante 10 minutos.

2. Tome 40 ul de líquido transparente de capa superior en un nuevo tubo de centrífuga, agregue 1560 ul de solución redisoludora diluida, agite con un oscilador durante 30 segundos;

3. Tomar 50 µL para análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:200

6.Procedimientos ELISA

Instruccións

1. Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25 ℃).

2. Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.

3. La reproducibilidad del análisis ELISA depende, en gran medida, de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

4. Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

Procedimientos de operación

• Saque todos los reactivos necesarios del kit y colóquelos a temperatura ambiente (20 a 25 ℃) durante al menos 30 minutos.Tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse para que se mezcle uniformemente antes de usarlo.
• Diluya la solución estándar concentrada 5 por separado: tome 5 piezas de tubo de centrífuga de 2 ml, marque 0,0,4,1,2,3,6,10,8 ppb en consecuencia, agregue 900 µL de la solución redisoludora diluida en cada tubo, luego agregue las cinco soluciones estándar concentradas 10X en las 5 anteriores tubos en consecuencia, 100ul/tubo.Las 5 soluciones estándar diluidas serán: 0—0,0,4—4,1,2—12,3,6—36,10,8—108.
• Tome las tiras de micropocillos y los marcos de placas necesarios.Se volvió a sellar la microplaca no utilizada, se almacenó a 2-8 ℃, no se congeló.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.
• Agregue 50 µL de la muestra o solución estándar para separar los pocillos duplicados, luego agregue el conjugado enzimático, 50 µL cada pocillo, luego agregue 50 µL de la solución de anticuerpos en cada pocillo.Mezcle suavemente agitando la placa manualmente, selle la microplaca con la membrana de cubierta yincubar en25 ℃ en la oscuridadpara30 minutos.
• Vierta el líquido del micropocillo, agregue 250 µL/pocillo de tampón de lavado durante 15 a 30 segundos, repita tres o cuatro veces, luego agite para secar (si quedan burbujas después de batir, córtelas con las puntas limpias).
• Coloración: agregue 100 µL de la mezcla del sustrato A y el sustrato B en cada pocillo (Nota: mezcle el Sustrato A y el Sustrato B a 1:1, la mezcla debe usarse en 10 minutos, nunca use un recipiente de metal o metal para agitar la solución, de lo contrario El sustrato puede no ser válido).Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar en25℃ para15minutos en la oscuridad para colorear.
• Determinación: agregue 50 µL de la solución de parada en cada pocillo (el color del sustrato de azul a amarillo significa que la parada se realizó correctamente).Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual de 450/630 nm en 5 minutos).

7. Juicio de resultados

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de oxitetraciclina en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestra Ⅰ es 0,3 y el de la muestra Ⅱ es 1,0, mientras que los de las soluciones estándar son los siguientes: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,4 ppb, 1,415 para 1,2 ppb, 0,74 para 3,6 ppb , 0,313 para 10,8 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestra Ⅰ es de 3,6 a 10,88 ppb, y el de la muestra Ⅱ es de 0,4 a 1,2 ppb.

7.2 Determinación cuantitativa

El valor medio de los valores de absorbancia es equivalente al porcentaje del valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar dividido por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir,

B: el valor de DO promedio (pocillos dobles) de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores de semilogaritmo de las soluciones estándar de oxitetraciclina (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el factor de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de oxitetraciclina en la muestra.

8. Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada.
• Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción de manera uniforme y lave bien la microplaca; de lo contrario, se producirá una reproducibilidad no deseada.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 0 inferior a 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;La fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el paquete al vacío de la microplaca tiene fugas, su uso aún es válido, no afecta el resultado de la prueba, no dude en usarlo.