Detección de residuos de medicamentos veterinarios del equipo de prueba ELISA de Clenbuterol LSY-10012

Kit de prueba ELISA de Clenbuterol

N.º de catálogo LSY-10012

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de Clenbuterol en la muestra.El antígeno de acoplamiento está recubierto previamente sobre las tiras de los micropocillos.El Clenbuterol en la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por los anticuerpos anti-Clenbuterol.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Clenbuterol en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtienen los residuos de Clenbuterol.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.1ppb

Temperatura de incubación: 25 ℃

Tiempo de incubación: 30 minutos—15 minutos

Límite de detección

Orina 0,1 ppb

Tejido (método uno) 0,4 ppb

Tejido (método dos) 0,1 ppb

Alimentar 1 ppb

Índice de recuperación

Orina 95±22%

Tejido 75±20%

Alimentación 80±20%

Tasa de reacción cruzada

Clenbuterol 100%

Terbutalina <1%

Mabuterol <1%

Brombuterol <1%

Salbutamal < 1%

Ractopamina < 1%

3. Componentes

• Tiras de micropocillos: 12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una
• Solución estándar 6X (1 ml cada una): 0 ppb, 0,1 ppb, 0,3 ppb, 0,9 ppb, 2,7 ppb, 8,1 ppb
• Conjugado enzimático (7 ml) tapa roja
• Solución de trabajo de anticuerpos (10 ml) con tapa azul
• Sustrato A (7 mL) tapa blanca
• Sustrato B (7 mL) tapa negra
• Solución de parada (7 ml) tapa amarilla

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos:lector de microplacas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, oscilador, centrífuga, pipetas medidoras, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g)
• Micropipetas:monocanal 20-200 µL, 100-1000 µL y multicanal 30～300 µl;
• Reactivos:Acetonitrilo (CH₃CN), NaOH, acetato de etilo, metanol, n-hexano, HCl (aprox. 36,5%), Na₂ENTONCES₄(100%)

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben abordarse antes del pretratamiento)

• Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;
• Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

• HCl 0,1 M: disuelva 0,86 ml de HCl (aproximadamente 36,5 %) en agua desionizada hasta obtener 100 ml.
• NaOH 0,1 M: disolver 0,4 g de NaOH en agua desionizada hasta 100 ml.
• CH₃Solución CN-0,1 M de HCl: Ⅴ_CH3CN:Ⅴ_HCl=84:16

5.1Orina

Tomar 20 µL de orina clara, detectarla directamente (si la orina está turbia, se debe filtrar o centrifugar a 4000 r/min durante 10 min, luego tomar orina clara).Guárdelo en un ambiente congelado si no lo usa.

Pliegue de dilución de la muestra:1

5.2 Tejido

Método uno

• Pese 2 ± 0,05 g de muestra homogénea, colóquela en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregue 6 ml de agua desionizada, agite bien durante 2 minutos, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante 10 minutos. (Consejos : Si el contenido de grasa es mayor en la muestra, primero puede ponerla en el baño de agua a 85 ℃ durante 10 minutos después de agitarla, luego centrifugar)
• Tome 20 l de sobrenadante transparente para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:4

Método dos

1. Pesar 2±0,05 g de muestra homogénea, colocarla en un tubo de centrífuga de 50 ml, añadir 6 ml de CH₃Solución CN-0,1 M de HCl, agitar durante 2 min, centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante 10 min.

2. Tome 3 ml de sobrenadante transparente, agregue 2 ml de NaOH 0,1 M y 6 ml de acetato de etilo, agite durante 1 min, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante 10 min.Tome todo el sobrenadante (casi transparente), séquelo con nitrógeno o aire a 50 ~ 60 ℃.

• Agregue 1 ml de agua desionizada, mezcle durante 30 segundos y vuelva a disolver los residuos adecuadamente.
• Tome 20 l para el análisis.

Pliegue de dilución de la muestra: 1

5.3Fnecesitar

• Moler la muestra, pesar 1,0 ± 0,05 g, colocarla en un tubo de centrífuga de 50 ml, añadir 10 ml de metanol y luego añadir 5 g de Na.₂ENTONCES₄, agitar bien durante 2 min, centrifugar a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 min
• Tome 1 ml de sobrenadante (debe ser transparente), séquelo con nitrógeno o aire a 50 ~ 60 ℃.Agregue 1 ml de agua desionizada para disolver el residuo seco, luego agregue 1 ml de N-hexano.Mezclar adecuadamente durante 30 segundos, centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente 15 ℃ durante 5 min.Retire la fase orgánica de la capa superior.

3. Tome 20 µL de la fase de capa inferior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:10

• Procedimientos ELISA

Instrucciones

• Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25 ℃).
• Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.
• La reproducibilidad del análisis ELISA depende, en gran medida, de la consistencia de

lavado de platos.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

• Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

Procedimiento de operación

• Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos; tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse uniformemente antes de usarlo;Coloque las tiras de micropocillos necesarias en los marcos de las placas.Se volvió a sellar la microplaca no utilizada, se almacenó a 2-8 ℃, no se congeló.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.
• Agregue 20 µL de la muestra o la solución estándar en pocillos duplicados separados, luego agregue el conjugado enzimático, 50 µL/pocillo;y solución de trabajo de anticuerpos, 80 l/pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cobertura,incubar a 25 ℃ durante 30 min.
• Vierta el líquido del micropocillo, agite para secar sobre papel absorbente;agregar 250 µL/pocillo de agua desionizada, lavar 4-5 veces, 15-30 s cada vez, luego sacar y agitar para secar con papel absorbente (si quedan burbujas después de agitar, cortarlas con las puntas limpias).
• Coloración: agregue 50 l de solución de sustrato A y 50 l de solución B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar a 25 ℃ durante 15 minen eloscuro para la coloración.
• Determinación: añadir 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD de cada pocillo.(Se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 5 minutos).

7.Juicio de resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de DO de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de Clenbuterol en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) obtenido al comparar el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestra Ⅰ es 0,3 y el de la muestra Ⅱ es 1,0, el valor de DO de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,1 ppb, 1,415 para 0,30 ppb, 0,74 para 0,90 ppb, 0,313 para 2,7 ppb, 0,155 para 8,1 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestra Ⅰ es de 2,7 a 8,1 ppb, y el de la muestra Ⅱ es de 0,30 a 0,90 ppb.

• Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir

B: el valor de DO promedio (pocillos dobles) de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores de semilogaritmo de las soluciones estándar de Clenbuterol (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el factor de dilución, obteniendo finalmente la concentración de clembuterol en la muestra.

Usar el software profesional de este kit será más conveniente para un análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.

8.Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada;Continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
• Mezcle uniformemente, de lo contrario habrá una reproducibilidad no deseada.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 0 (0 ppb) inferior a 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;la fecha de producción está en la caja.

Observaciones: Si el paquete al vacío de las placas de microtitulación tiene fugas, la placa de microtitulación es normal y efectiva, no afecta el resultado experimental.Siéntase libre de utilizarlo.