Kit de prueba ELISA de anticuerpos contra el virus de la peste de los pequeños rumiantes (PPRV) para ovinos

Kit ELISA de anticuerpos contra el virus de la peste de los pequeños rumiantes (PPRV)

N.º de catálogo LSY-30035

1.Uso

Se utiliza para detectar cualitativamente el anticuerpo PPRV en suero y plasma de ovejas y cabras, evaluar el estado inmunológico de la vacuna contra la peste de pequeños rumiantes y el diagnóstico serológico asistido de animales infectados.

2. Principio

Este kit utiliza el método ELISA de competición; el antígeno PPRV está recubierto previamente con tiras de micropocillos enzimáticos.Al realizar la prueba, agregue una muestra de suero diluida y un conjugado de enzima monoclonal; después de la incubación, si hay un anticuerpo específico del virus PPR, se unirá al antígeno PPRV en la placa de recubrimiento y evitará que el anticuerpo monoclonal marcado con enzima se una al antígeno en la placa. ;por el contrario, si la muestra no contiene anticuerpo específico contra PPRV, no se unirá a la placa de recubrimiento.Después de lavar para eliminar el anticuerpo no unido y otros componentes, agregue sustrato a los micropocillos para formar un producto azul mediante catálisis enzimática.Después de agregar la solución de parada para terminar la reacción, use un lector de microplacas a una longitud de onda doble de 450 nm/630 nm para medir el valor de absorbancia A en el pocillo de reacción.

3.Los componentes del kit.

4.Esteraserialrno requeridopagproporcionard

1) Micropipeta: 0,5-10ul, 10ul-100ul, 100ul-1000ul.

2) Puntas de pipeta desechables.

3) Graduado: 500ml.

4) Lector de Microplacas: 96 pocillos con longitud de onda de 450/630 nm.

5) Agua destilada o agua desionizada.

6) Lavadora de microplacas

5.Muestrapreparación

Tome sangre entera del animal y obtenga suero utilizando el método habitual; el suero debe ser brillante y sin hemólisis.

6.Preparación del tampón de lavado

Devuelva el tampón de lavado concentrado 10X a temperatura ambiente antes de usarlo. Si hay cristales de sal, colóquelo en un baño de agua a 37 ℃ durante 5 a 10 minutos para disolverlo, luego dilúyalo con agua desionizada 10 veces (por ejemplo, para preparar 200 ml de solución de lavado). tampón: 180 ml de agua desionizada + 20 ml de tampón de lavado concentrado 10X, mezclar uniformemente).El tampón de lavado diluido se puede almacenar a 4 ℃ durante aproximadamente una semana.

• Notas

1) Devuelva todos los reactivos a temperatura ambiente antes de usarlos y colóquelos a temperatura ambiente durante al menos 30 minutos.Agítelo uniformemente antes de usarlo y guárdelo entre 2 y 8 ℃ después de su uso.

2) No mezcle reactivos de diferentes kits y números de lote diferentes, evite que los reactivos se contaminen durante el uso.

3) El sustrato y la solución de parada pueden irritar la piel y los ojos; tenga cuidado al usarlos.

4) No exponer el sustrato a luz intensa y evitar el contacto con el oxidante.

• Las placas recubiertas con PPRV-Ag deben estar selladas y a prueba de humedad.Vuelva a colocar la placa MicroWell no utilizada en una bolsa de aluminio seca y séllela a 2-8 ℃.
• Todos los desechos deben tratarse bien para evitar la contaminación antes de desecharlos.
• El estricto cumplimiento de las instrucciones de funcionamiento puede obtener los mejores resultados.La operación de pipeteo, el tiempo y el lavado de todo el proceso deben ser precisos.

• Procedimiento de prueba

1) Tome la microplaca prerevestida (según la cantidad de muestras, se puede desmontar y usar por separado), coloque 2 pocillos para el control positivo, 2 pocillos para el control negativo, agregue 50 µl de suero de control positivo o suero de control negativo a su pocillo. respectivamente;otros son pocillos de muestra, primero agregue 40 µl de dilución de muestra y luego agregue 10 µl de muestra en cada pocillo.Por último, agregue 50 µl de conjugado enzimático a cada pocillo, agite suavemente para mezclarlo uniformemente, cubra la placa con papel de aluminio adhesivo yincubara 37 ℃ durante30minutos;

2) Abra la lámina adhesiva, deseche el líquido del pocillo, agregue tampón de lavado diluido a cada pocillo, 300 ul/pocillo, manténgalo estático durante 30 segundos, luego deseche el líquido, repita el paso anterior 5 veces, al final aleta para secar con el papel absorbente;

3) Agregue la solución de sustrato, 100 ul/pozo, mezcle uniformemente y luego cúbrala con lámina adhesiva.incubara 37 ℃en la oscuridadpara15minutos;

4) Agregue 50 ul/pocillo de solución de parada para detener la reacción, mida el resultado en 10 minutos.

9.Rjuicio de resultados

Lea el valor de OD con ELISA Reader a 450 nm (630 nm como referencia).

Para que el ensayo sea válido:

Valor de DO del control negativo (N) ≥1,0,

Valor de DO del control positivo (P) ≤0,3;

método de cálculo:

Valor OD de la muestra/valor OD promedio del control negativo (N) = valor S/N

Resultadosinterpretación

Valor S/N≥0,5: Negativo

Valor S/N<0,5: Positivo

10.Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenar a 2 ~ 8 ℃ en la oscuridad, no congelado, fecha de caducidad: 12 meses.